荧光定量PCR技术平台

实时荧光定量PCR是一种实时监控PCR反应过程中核酸扩增的技术,通常可以在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号的变化实现对初始模板的定量分析。

根据荧光标记物的不同,荧光定量PCR的原理一般可分为Taqman探针法和荧光染料法。Taqman探针法是通过在PCR反应中加入5’端有荧光基团修饰的水解探针,利用PCR延伸(extending)过程中DNA聚合酶的外切酶活性降解水解探针,以释放荧光基团,通过检测荧光信号强度来监控PCR扩增。而荧光染料法则是在PCR反应中加入荧光染料如SYBR Green I等,荧光染料在嵌入到双链DNA时,能够检测到极强的荧光信号,且荧光强度与双链DNA量成正比,因此检测荧光强度能监控PCR的扩增。

与常规PCR技术相比,实时荧光定量PCR的最大特点在于加入了荧光染料或者Taqman探针,可以对初始模板进行精确定量分析;同时其检测灵敏度、特异性、精确性与常规PCR相比均有较大优势;此外,实时荧光定量PCR的扩增和检测同步完成,不需开盖操作,不仅极大减少交叉污染的概率,且自动化程度得到极大提高;如果加入的是荧光染料,还可以对PCR产物进行熔解曲线分析。

目前,旌准医疗已经引进了美国赛默飞世尔(ThermoFisher)、罗氏(Roche)、安捷伦(Agilent)、伯乐(Rio-Rad)、IT-IS等公司和品牌的各型实时荧光定量PCR系统。基于以上的荧光定量PCR系统,我们正在开展病原微生物基因检测、药物基因组学SNP检测、肿瘤基因检测、基因甲基化检测等临床分子诊断试剂的研发工作,并将继续应用范围扩大到科研服务等领域。

                          

Roche LightCycler 480                                                    MyGo Pro

                         

ABI 7500                                                                        ABI StepOne

                         

Agilent AriaMX                                                                BioRad CFX96